肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)是本世紀(jì)引起醫(yī)院和社區(qū)獲得性感染(如肺炎、敗血癥和肝膿腫)的最常見(jiàn)最棘手的人獸共患病原體之一。近年來(lái)，由于長(zhǎng)期不合理使用抗菌藥物，多重耐藥(MDR)肺炎克雷伯菌的致病率逐年上升，嚴(yán)重威脅人和動(dòng)物的健康。替加環(huán)素耐藥在肺炎克雷伯菌中越來(lái)越多地被觀察到并引起高度關(guān)注。tmexCD1-toprJ1是近年來(lái)從我國(guó)的雞和患者中分離的肺炎克雷伯菌中質(zhì)粒攜帶的一種新型的耐藥-結(jié)瘤-分裂(RND)型外排泵基因簇，可引起包括替加環(huán)素在內(nèi)的多藥耐藥。
抗生素佐劑策略是通過(guò)抑制細(xì)菌耐藥性或增強(qiáng)抗生素殺傷能力來(lái)延長(zhǎng)現(xiàn)有抗生素壽命的具有成本效益且有前景的方法。在過(guò)去幾年中，基于替加環(huán)素與其他抗生素的聯(lián)合療法已被廣泛使用，但治療效率不令人滿意。與抗生素不同，非抗生素輔助策略可以通過(guò)增強(qiáng)抗生素的殺傷作用來(lái)最大化現(xiàn)有抗生素的抗菌功效，這是對(duì)抗抗生素耐藥性的有希望的方法。到目前為止，已經(jīng)報(bào)道了一些關(guān)于替加環(huán)素的非抗生素佐劑的研究。有研究表明，tmexCD1-toprJ1陽(yáng)性細(xì)菌的耐替加環(huán)素機(jī)制為通過(guò)細(xì)菌膜上的外排泵將替加環(huán)素泵出，從而減少替加環(huán)素在細(xì)菌體內(nèi)的積累。因此通過(guò)抑制tmexCD1-toprJ1陽(yáng)性細(xì)菌外排泵的功能，為tmexCD1-toprJ1陽(yáng)性細(xì)菌感染防治和發(fā)現(xiàn)潛在先導(dǎo)化合物提供了新的途徑。
下面介紹駱駝蓬靈在制備tmexCD1?toprJ1介導(dǎo)的外排泵抑制劑中的應(yīng)用，并通過(guò)生長(zhǎng)曲線試驗(yàn)驗(yàn)證駱駝蓬靈能夠破壞細(xì)菌外排泵的功能，并且在體內(nèi)模型中體現(xiàn)了良好的抗tmexCD1?toprJ1陽(yáng)性肺炎克雷伯菌感染效果。這為肺炎克雷伯菌感染防治提供了新的途徑和潛在先導(dǎo)化合物。
生長(zhǎng)曲線測(cè)定
挑取一個(gè)K.pneumoniae T2單菌落，接種到裝有3mL LB肉湯的試管中，37℃、180rpm震蕩培養(yǎng)過(guò)夜。過(guò)夜培養(yǎng)物以1:100的比例在裝有150mL新鮮MHB肉湯的200mL錐形瓶中擴(kuò)增，直至OD600nm
達(dá)到0.3。將OD600nm
值為0.3的菌液倒入三個(gè)經(jīng)過(guò)高壓滅菌和干燥的50mL小錐形瓶中，每個(gè)小瓶20mL。在小瓶中分別加入0、64μg/mL、128μg/mL的駱駝蓬靈，每隔半小時(shí)用分光光度計(jì)測(cè)量一次OD600nm
值，在37℃下記錄6小時(shí)的數(shù)據(jù)，并形成生長(zhǎng)曲線。實(shí)驗(yàn)一式三份，獨(dú)立重復(fù)。
結(jié)論：64μg/mL、128μg/mL的駱駝蓬靈分別處理K.pneumoniae T2后，對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)幾乎沒(méi)有影響，見(jiàn)圖。
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