2.3菌株HP-1對(duì)甲胺磷的耐受能力
結(jié)果表明，初期能夠耐受甲胺磷的濃度高達(dá)8 000~10 000 mg/L，其菌株的滯止期5~6d，后期的生長(zhǎng)十分緩慢，培養(yǎng)液為棕黃色；但是經(jīng)過(guò)連續(xù)幾代低濃度培養(yǎng)，菌株的耐受能力發(fā)生改變，其耐受能力為4 000~6 000 mg/L，表明其耐受能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)所使用的濃度劑量。取其濃度1000mg/L的樣品，用透視電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)（圖8），與無(wú)農(nóng)藥處理的比較發(fā)現(xiàn)細(xì)胞膜內(nèi)細(xì)胞器有所變化（具體不清），筆者認(rèn)為這可能與該菌株降解農(nóng)藥的機(jī)制有關(guān)。
2.4菌株HP-1對(duì)甲胺磷的降解
2.4.1菌株HP-1對(duì)甲胺磷的降解率
菌株HP-1在含有500mg/L和1000mg/L甲胺磷農(nóng)藥的PSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)7d，取樣用GC氣相色譜測(cè)定樣品中的農(nóng)藥殘留。結(jié)果表明：利用白熾燈作為光源促進(jìn)菌株HP-1的生長(zhǎng)，但是光源對(duì)農(nóng)藥的光解作用并不大，可能歸功于光源不能直接照射；培養(yǎng)后第7d，500mg/L和1000 mg/L培養(yǎng)液中的甲胺磷的濃度分別為174mg/L和504mg/L，其平均降解率分別為65.20%和49.60%，表明菌株HP-1對(duì)甲胺磷的降解率與起始農(nóng)藥濃度有一定的影響，可能是菌體對(duì)高濃度農(nóng)藥適應(yīng)期和耐受能力相對(duì)較長(zhǎng)導(dǎo)致所致。
2.4.2不同培養(yǎng)條件對(duì)菌株HP-1降解率的影響
在有無(wú)酵母存在的情況下，菌株HP-1在甲胺磷濃度0~800mg/L之間，生長(zhǎng)速度基本無(wú)差異；但是隨著濃度提高，加酵母的比未加酵母的生長(zhǎng)速度快1~2d。另外，培養(yǎng)10d后取樣分析，其相應(yīng)濃度條件下，菌株的降解速率加酵母的明顯高于未加酵母的（圖9），低濃度時(shí)加入酵母不利于菌株對(duì)農(nóng)藥的降解，出現(xiàn)未加酵母的比加酵母的降解率高。在耐受范圍內(nèi)均隨著濃度的增加，其降解率也隨著增加，微生物對(duì)農(nóng)藥降解由于受到許多因素的影響，其降解率也出現(xiàn)波動(dòng)。
2.4.3菌株HP-1的有機(jī)磷農(nóng)藥降解譜
根據(jù)SQTR[9，12]數(shù)量效應(yīng)，就菌株HP-1對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的降解譜進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明：該菌株能夠利用樂(lè)果、毒死蜱蜱、三唑磷、辛硫磷作為唯一碳源生長(zhǎng)。培養(yǎng)7d，對(duì)400mg/L樂(lè)果和400 mg/L毒死蜱蜱的降解效果為45.4%和51.5%，證明該菌株具有降解譜廣的特性，也驗(yàn)證了有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌降解酶廣譜的特性。
2.5菌株HP-1的發(fā)酵液對(duì)蘿卜種子發(fā)芽的影響
試驗(yàn)初步表明（圖10）：第2d和第3d發(fā)酵液處理的種子發(fā)芽率高于培養(yǎng)基和對(duì)照，其中200倍發(fā)酵液處理能夠明顯提高種子發(fā)芽，高達(dá)72.22%，并且種子發(fā)芽時(shí)間提早0.5d左右，培養(yǎng)基和清水之間無(wú)明顯差異。表明該菌株的發(fā)酵液能夠促進(jìn)蘿卜種子萌發(fā)，具有促生生物活性。
3討論
根據(jù)菌株HP-1的形態(tài)學(xué)和生理生化特征，參考《伯杰氏手冊(cè)第九版》，初步鑒定菌株HP-1為沼澤紅假單胞菌[Rhodopesudomonas plaustris]。最適生長(zhǎng)溫度為30~37℃，培養(yǎng)基的pH值為6.5~7.0。能夠以多種有機(jī)物和有機(jī)磷農(nóng)藥作為唯一碳源生長(zhǎng)，對(duì)有機(jī)磷的耐受能力高于目前已經(jīng)報(bào)道的有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌。另外目前所分離的有機(jī)磷降解菌主要集中于假單胞菌屬[Pesudomonas]、節(jié)桿菌屬[Arthrobacter]、黃桿菌屬[Flavobacterium]、產(chǎn)堿桿菌屬[Alcaligenes]、短桿菌屬[Brevibacterium]等無(wú)芽孢類(lèi)型細(xì)菌而未見(jiàn)該菌的報(bào)道，這反應(yīng)了自然界中可降解有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物廣泛存在和生物多樣性[10,11,16,20,23]。
培養(yǎng)后第7d，該菌株可降解甲胺磷65.2%（500 mg/L）和49.6%（1 000 mg/L），樂(lè)果45.4%（400 mg/L），毒死蜱蜱61.5%（400 mg/L），另外該菌株也能夠以三唑磷、辛硫磷作為唯一碳源生長(zhǎng)，其降解試驗(yàn)正在進(jìn)行中。這印證了有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌降解酶的廣譜性特征[17,21,22,24~26]。在人為加壓選擇壓力下，細(xì)胞形態(tài)超微結(jié)構(gòu)表明，細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，目前還不清楚具體變化，估計(jì)與該菌株降解農(nóng)藥的降解機(jī)制有關(guān)，為實(shí)驗(yàn)室后續(xù)研究工作提供了基礎(chǔ)條件。
目前所有參考文獻(xiàn)還未見(jiàn)具有促生生物活性的農(nóng)藥降解菌的報(bào)道，筆者基于艾格里微生物的研制與開(kāi)發(fā)，首先展開(kāi)農(nóng)藥降解菌的促生活性研究。試驗(yàn)結(jié)果表明能夠明顯提高水稻、辣椒、蘿卜種子的發(fā)芽率，提早發(fā)芽時(shí)間；室內(nèi)以茄科作物辣椒作為試驗(yàn)材料，利用培養(yǎng)液噴施，能夠提高葉綠素含量，植物苗期素質(zhì)全面提高（其結(jié)果將另文發(fā)表），這也是我們首次發(fā)現(xiàn)該菌株發(fā)酵液具有促生生物活性。
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