3討論


研究報道，在正常膀胱黏膜上皮和黏膜固有層組織中，有大量的CD4+、CD8+T細胞和DC細胞存在，而巨噬細胞只少量存在于固有層組織中。但是，膀胱癌組織中免疫細胞的分布情況并不清楚。因此，我們進行了前期研究，結果表明除CD3、CD8外，巨噬細胞表面特征性CD68分子在癌組織的間質細胞中的染色呈強陽性，而CD68在癌旁正常組織中的表達呈陰性，提示巨噬細胞在膀胱癌組織中的浸潤增多可能與膀胱癌的發(fā)生和發(fā)展有密切關系。


巨噬細胞是在組織中定植分化的單核細胞，具有吞噬活性，通常根據其分化狀態(tài)和功能作用分為M1和M2亞型。M1巨噬細胞具有促炎特性(例如分泌IL-12和活性氧)，可以識別和殺傷腫瘤細胞；M2巨噬細胞具有抗炎特性，并分泌IL-10，生長因子-β(TGF-β)，和促血管生成因子等，可以促進腫瘤細胞的增殖和轉移。在腫瘤組織中，M1巨噬細胞數目越多，患者預后越好；反之，M2巨噬細胞數目多，則患者預后較差。本研究采用免疫組化實驗檢測M1和M2型巨噬細胞表面特征性標志分子在膀胱癌組織中的表達情況，發(fā)現M2型巨噬細胞表面特征性分子CD163在癌間質細胞中的表達明顯升高，提示M2型巨噬細胞在膀胱癌微環(huán)境中聚集增多，可能與膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展存在密切關系。


研究報道，早期的腫瘤細胞可分泌CCL2、IL-10、TGF-β等募集單核細胞至上皮內并向M2型巨噬細胞極化，成為腫瘤相關巨噬細胞(tumor associated machrophage，TAM)。反過來，TAM又可分泌IL-10、TGF-β、EGF、Wnt等影響腫瘤細胞內信號傳導通路，引起腫瘤細胞的增殖和轉移。因此，TME中的TAM可通過調控腫瘤細胞內相關的信號通路促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。為篩選巨噬細胞調控的下游靶點基因，本研究通過對膀胱癌和癌旁組織的轉錄組測序并結合膀胱癌組織中浸潤的免疫細胞評分方法，篩選出受巨噬細胞調控的下游靶點基因CLDN10。CLDN10蛋白分子定位于細胞膜，是claudin家族成員之一，而claudin家族構成了上皮細胞和內皮細胞間的分子屏障，是細胞間緊密連接(tight junction，TJ)的重要組成之一。近年來的研究表明，CLDN10的表達異?；蚬δ苁д{與人體腫瘤的發(fā)生和進展有密切關系，CLDN10的表達與甲狀腺癌、卵巢癌、結直腸癌和腎癌等腫瘤患者的預后呈負相關。在膀胱癌中，TCGA數據庫分析結果表明CLDN10的表達與膀胱癌患者的預后呈負相關。國內也有研究報道CLDN10在膀胱癌組織表達，且CLDN10表達失調可能與膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展過程相關。但是巨噬細胞調控CLDN10基因表達的具體作用機制尚不清楚。


國外研究結果表明，巨噬細胞可分泌TNF-α，TNF-α可促進肝癌、皮膚癌等腫瘤細胞的增殖。SCHMITZ等研究發(fā)現TNF-α可以影響TJ蛋白的結構和功能造成小腸上皮的分子間屏障的破壞，引起小腸炎。本研究結果也表明，當敲低膀胱癌細胞中CLDN10的表達后，膀胱癌細胞的生長能力和細胞克隆形成能力明顯下降，說明CLDN10具有促進膀胱癌細胞生長和增殖的能力。


膀胱癌是一種高度惡性的腫瘤，易通過淋巴結引流發(fā)生遠處轉移。眾所周知，腫瘤細胞的細胞上皮-間質轉化(EMT)使細胞失去極性和細胞間的分子屏障，導致細胞的運動能力加強，促使腫瘤細胞發(fā)生轉移。CLDN10作為上皮細胞膜上的緊密連接蛋白重要構成之一，通過使細胞之間形成緊密結合而構成了細胞間的屏障，限制了細胞的運動活性和分子物質在細胞間的濾過。那么，CLDN10在膀胱癌組織中高表達是否會促進膀胱癌細胞轉移呢？有研究表明，CLDN10的表達降低或在細胞膜上的定位減少則可以引起細胞極性和運動能力的改變，從而促進腫瘤細胞的轉移。那么，CLDN10的高表達與膀胱癌細胞EMT是否相關呢？本研究結果表明，當敲低膀胱癌細胞CLDN10的表達后，EMT相關蛋白Snail、Vementin、Twist的表達水平下降，說明CLDN10具有促進膀胱癌細胞EMT發(fā)生的能力。


本研究對膀胱癌腫瘤微環(huán)境中巨噬細胞促進膀胱癌細胞的增殖和轉移的機制進行了初步探索，通過體內外基因測序的方法聯合膀胱癌微環(huán)境免疫評分的方法篩選出與巨噬細胞調控相關的CLDN10基因，并通過軟件分析和查閱文獻的方法對巨噬細胞調控CLDN10基因促進膀胱癌細胞增殖和轉移的機制進行了初步探索，證明了CLDN10與膀胱癌的增殖和轉移有關，但是這一過程是否與巨噬細胞的調控相關及其具體的作用機制仍尚不清楚，需要進一步深入地研究。從長遠打算，研究巨噬細胞促進膀胱癌細胞發(fā)生、發(fā)展的分子機制，可以為免疫治療膀胱癌提供新的理論依據和治療策略，研究意義重大。


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