2結(jié)果
2.1產(chǎn)果膠酶菌株的分離篩選
利用產(chǎn)果膠酶的菌株可以使加溴酚藍的培養(yǎng)基產(chǎn)生黃色水解圈的原理，本實驗從土壤、腐爛水果等生境復篩得到黃色水解圈較大的7株霉菌（見圖1和圖2），對其進行Dp/Dc值及酶活性的測定，結(jié)果見表1.
圖1篩選所獲部分菌落圖
圖2 L5菌株的培養(yǎng)特征和形態(tài)特征
表17株產(chǎn)果膠酶菌株的Dp/Dc值和酶活性比較
由表1可以看出，菌株的酶活性隨著Dp/Dc值增大而增大，L5菌株的Dp/Dc值最高，相應的酶活性為39940 U·min-1·mL-1.L5菌株是從浙江東陽荷塘淤泥中篩選得到的。圖2（a）為L5菌株在溴酚藍篩選培養(yǎng)基上的黃色水解圈照片。
2.2培養(yǎng)時間對L5菌株產(chǎn)果膠酶的影響
對每隔2 h取樣得菌體進行干質(zhì)量測量，并繪制生長曲線見圖3.由圖3可知：將菌體從種子培養(yǎng)基中接入搖瓶培養(yǎng)基約需0——10 h的停滯期；接著10——24 h,菌絲生長，菌體質(zhì)量進入對數(shù)期；其后曲線趨于平緩，24——68 h是菌體質(zhì)量的穩(wěn)定期；從68 h始，菌體開始自溶，進入衰亡期。
每隔2 h測量一次L5菌株產(chǎn)生的果膠酶酶活性，以酶活性為縱坐標、培養(yǎng)時間為橫坐標繪制曲線（見圖3）。由圖3可知：在2——70 h內(nèi)，L5菌株產(chǎn)果膠酶的活性逐漸上升，在菌體穩(wěn)定期結(jié)束時酶活性達到最大值39940 U·min-1·mL-1;在76——80 h內(nèi)，果膠酶的活性下降。
圖3 L5菌株的生長曲線
2.3 L5菌株的分類鑒定
2.3.1形態(tài)學鑒定
1）培養(yǎng)特征：PDA培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)3 d即形成較典型的菌落，菌落中間呈藍綠色，邊緣為白色，直徑約19 mm,輪廓規(guī)則，外觀呈絨毛狀。
2）形態(tài)特征：28℃PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)3 d,顯微鏡下觀察L5菌株的菌絲形態(tài)、分生孢子梗的分枝情況、帚狀枝及瓶梗的類型等顯微形態(tài)特征。由圖2可見：菌絲細胞絲狀交織，具橫隔；分生孢子梗不具足細胞，帚狀枝為對稱雙輪型，瓶梗細長漸變尖銳；分生孢子橢圓形，呈藍綠色。
2.3.2 ITS的PCR擴增與序列分析
用真菌通用引物ITS1/ITS4對L5菌株進行PCR擴增，獲一長度為572 bp的目的片段。將測序所得序列在美國國立生物技術(shù)信息中心（NCBI）進行BLAST比對和同源性分析，結(jié)果表明L5菌株的ITS序列與Penicillium oxalicum同源性最高達99%.基于L5菌株的ITS序列建立的系統(tǒng)發(fā)育樹見圖4,結(jié)合形態(tài)特征鑒定，將L5菌株鑒定為草酸青霉菌（Penicillium oxalicum）。
圖4基于L5菌株的ITS序列建立的系統(tǒng)發(fā)育樹
3討論與結(jié)論
果膠酶的研究應用迄今已有70多年的歷史，其用途廣泛，現(xiàn)階段產(chǎn)量已是世界四大酶制劑之一，而中國現(xiàn)有的生產(chǎn)果膠酶工藝存在著很多問題，如固體發(fā)酵成本高、生產(chǎn)率低、易染菌等。面對國外果膠酶產(chǎn)品的優(yōu)勢，我國必須利用豐富的微生物資源，研究新的生產(chǎn)工藝，加緊篩選出擁有自主知識產(chǎn)權(quán)、低成本、無污染、滿足市場需求的商業(yè)化果膠酶。
本研究從污泥中篩選得到一株高產(chǎn)果膠酶的菌株，對其進行了形態(tài)學鑒定，并對其進行了ITS測序，確定其為草酸青霉菌。該菌的ITS序列基因已登錄GenBank,登錄號為：HQ680452.
本研究利用浙江來源豐富的桔皮和米糠作為搖瓶培養(yǎng)基材料，研究表明：該菌株在28℃，培養(yǎng)基初始pH 6.0,轉(zhuǎn)速160 r/min的條件下，培養(yǎng)70 h果膠酶活性最高，可達39940 U·min-1·mL-1;并且，該菌株利用成本低廉、天然、含果膠的植物材料為培養(yǎng)基，不僅實現(xiàn)了廢物再利用，也可以使其高產(chǎn)?？梢?，對該菌株的研究具有潛在的意義，其應用前景廣闊。
相關(guān)新聞推薦
1、枯草芽孢桿菌LBD-1形態(tài)特征、生長曲線、抗逆性及發(fā)酵后飼料特性（一）
2、微生物共代謝類型具體表現(xiàn)及應用現(xiàn)狀
3、細菌生長曲線圖用于評估菌血癥患者的大腸桿菌載量與疾病嚴重程度關(guān)聯(lián)性