1.5小鼠肝、脾定殖能力測(cè)定


將鼠傷寒沙門(mén)菌標(biāo)準(zhǔn)菌株LT2及基因缺失菌株ΔompN、ΔfadL、ΔybfM、Δhfq、ΔrybB、ΔrybB&Δhfq菌液濃度調(diào)整為1×108CFU·mL-1，制備方法同1.4.將小鼠隨機(jī)分組，每組5只，腹腔注射菌液0.5 mL·只-1，分別在6和48 h后取小鼠肝臟和脾臟稱(chēng)重，計(jì)算肝臟、脾臟指數(shù).勻漿后使用無(wú)菌PBS稀釋?zhuān)?00μL稀釋液進(jìn)行10和100倍稀釋涂板，重復(fù)3次，置于37℃溫箱中過(guò)夜培養(yǎng)，菌落計(jì)數(shù)，計(jì)算相應(yīng)組織的載菌量.


1.6數(shù)據(jù)處理


數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，通過(guò)GraphPad Prism 8.0.2軟件分析數(shù)據(jù)和制圖.


2結(jié)果與分析


2.1鼠傷寒沙門(mén)菌株生長(zhǎng)曲線


由圖1可以看出：鼠傷寒沙門(mén)菌標(biāo)準(zhǔn)菌株LT2及基因缺失菌株ΔompN、ΔfadL、ΔybfM、Δhfq在液體LB中有相似的生長(zhǎng)曲線；雖然ΔrybB和ΔrybB&Δhfq生長(zhǎng)速度相較于標(biāo)準(zhǔn)菌株有所減緩，但是變化不顯著.

圖1鼠傷寒沙門(mén)菌LT2及基因缺失菌株生長(zhǎng)曲線


2.2鼠傷寒沙門(mén)菌株的毒力


結(jié)果顯示：鼠傷寒沙門(mén)菌標(biāo)準(zhǔn)菌株LT2對(duì)小鼠的LD50為3.97×107CFU；基因缺失菌株ΔompN、ΔfadL、ΔybfM對(duì)小鼠的LD50分別為1.58×105、6.29×105、9.97×105CFU,與LT2相比毒力明顯增強(qiáng)；基因缺失菌株Δhfq和ΔrybB&Δhfq對(duì)小鼠的致死率未高于50%；而基因缺失菌株ΔrybB對(duì)小鼠的LD50為9.97×107CFU，與LT2相比毒力有所下降(表2).

表2鼠傷寒沙門(mén)菌株對(duì)小鼠的LD501)


2.3基因缺失菌株在脾臟上的定殖能力


圖2顯示：小鼠腹腔注射各菌株6 h后，相對(duì)于LT2,Δhfq、ΔrybB、ΔfadL、ΔybfM處理組的脾臟指數(shù)極顯著上升(P<0.01)；ΔrybB&Δhfq處理組的脾臟指數(shù)顯著上升(P<0.05)；而ΔompN處理組的脾臟指數(shù)低于LT2，但差異不顯著(P>0.05).圖3顯示：相對(duì)于LT2，小鼠注射Δhfq6 h后脾臟上的載菌量顯著降低(P<0.05)；注射其余菌株后的脾臟載菌量與LT2差異不顯著(P>0.05).


小鼠注射各菌株48 h后，相對(duì)于LT2，各處理組的脾臟指數(shù)極顯著升高(P<0.01)(圖2).相較于LT2，注射ΔrybB&Δhfq和Δhfq48 h后脾臟上的載菌量顯著降低(P<0.05)；注射其余菌株后脾臟上的載菌量與LT2差異不顯著(P>0.05)(圖3).

“**”代表差異極顯著(P<0.01)；“*”代表差異顯著(P<0.05)；“ns”代表差異不顯著(P>0.05).圖2小鼠注射各菌株后的脾臟指數(shù)


2.4基因缺失菌株在肝臟上的定殖能力


圖4顯示：小鼠腹腔注射各菌株6 h后，相對(duì)于LT2，Δhfq、ΔrybB&Δhfq、ΔompN處理組的肝臟指數(shù)極顯著下降(P<0.01)；ΔybfM處理組的肝臟指數(shù)顯著下降(P<0.05)；而ΔrybB和ΔfadL處理組的肝臟指數(shù)變化不顯著(P>0.05).圖5顯示：相對(duì)于LT2，小鼠注射Δhfq和ΔrybB&Δhfq6 h后的肝臟載菌量顯著降低(P<0.05)；而ΔompN、ΔfadL、ΔybfM、ΔrybB處理組的肝臟載菌量無(wú)顯著變化(P>0.05).

“**”代表差異極顯著(P<0.01)；“*”代表差異顯著(P<0.05)；“ns”代表差異不顯著(P>0.05).圖4小鼠注射各菌株后的肝臟指數(shù)Fig.4 Liver index of mice after injected with different strains


小鼠注射各菌株48 h后，相對(duì)于LT2，ΔrybB、ΔfadL、ΔybfM處理組的肝臟指數(shù)極顯著下降(P<0.01)；ΔrybB&Δhfq處理組的肝臟指數(shù)顯著下降(P<0.05)；而Δhfq和ΔompN處理組的肝臟指數(shù)變化不顯著(P>0.05)(圖4).相對(duì)于LT2，注射ΔrybB和ΔfadL48 h后肝臟載菌量變化不顯著(P>0.05)；而Δhfq和ΔrybB&Δhfq處理組的肝臟載菌量顯著下降(P<0.05)；ΔompN和ΔybfM處理組的肝臟載菌量顯著上升(P<0.05).


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