2結(jié)果與分析
2.1菌種的分離鑒定
通過(guò)對(duì)白星花金龜幼蟲(chóng)蟲(chóng)糞樣品進(jìn)行分離，總共得到細(xì)菌5株、真菌3株，結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)對(duì)所分離的菌株進(jìn)行綜合鑒定。
2.1.1細(xì)菌。
2.1.1.1形態(tài)學(xué)觀察。
將分離純化的細(xì)菌培養(yǎng)于LB固體培養(yǎng)基上，觀察菌落形態(tài)，并挑取單菌落進(jìn)行顯微觀察。各細(xì)菌菌落形態(tài)及菌體形態(tài)見(jiàn)表1，其中分離出的4株細(xì)菌革蘭氏染色后均呈陽(yáng)性。
2.1.1.2分子鑒定
將細(xì)菌16S rDNA測(cè)序結(jié)果提交至NCBI進(jìn)行Blast對(duì)比，并結(jié)合《細(xì)菌鑒定手冊(cè)》確定待測(cè)菌株的分類地位。分子鑒定結(jié)果顯示，xh1菌株為纖維化纖維微細(xì)菌（Cellulosimicrobium cellulans），dh1菌株為谷氨酸桿菌（Glutamicibacter halophytocola），hb2菌株為鉛黃腸球菌（Enterococcus casseliflavus），hd1菌株為原玻璃蠅節(jié)桿菌（Arthrobacter protophormiae），hb1菌株為灰色鏈霉菌（Streptomyces griseolus）。
2.1.2真菌。
2.1.2.1形態(tài)學(xué)觀察。
將分離純化的菌株培養(yǎng)于麥芽汁固體培養(yǎng)基和PDA固體培養(yǎng)基上，觀察其菌落形態(tài)，并挑取單菌落進(jìn)行顯微觀察。各真菌菌落形態(tài)及菌體形態(tài)見(jiàn)表2。
2.1.2.2分子鑒定。將測(cè)序結(jié)果提交至NCBI進(jìn)行Blast對(duì)比，并結(jié)合《酵母菌鑒定手冊(cè)》《真菌鑒定手冊(cè)》確定待測(cè)菌株的分類地位。分子鑒定結(jié)果顯示，bd1菌株為熱帶假絲酵母（Candida tropicalis），SM2菌株為長(zhǎng)枝木霉（Trichoderma longibrachiatum），SX2菌株為白地霉（Geotrichum candidum）。
2.2降解蛋白質(zhì)和纖維素能力
酪蛋白培養(yǎng)基上菌株生長(zhǎng)結(jié)果顯示（表3），纖維化纖維微細(xì)菌和灰色鏈霉菌能夠產(chǎn)生明顯的透明圈，透明圈HC值分別為7.259±0.417、1.971±0.584，說(shuō)明其具有一定的蛋白質(zhì)降解能力；羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)后剛果紅染色結(jié)果顯示（表4），原玻璃蠅節(jié)桿菌、灰色鏈霉菌、白地霉和長(zhǎng)枝木霉能夠產(chǎn)生透明圈，透明圈HC值分別為1.166±0.028、2.044±0.245、1.075±0.029、1.288±0.048，說(shuō)明其具有一定的纖維素降解能力。陳燕紅等［9］研究表明，纖維化纖維微細(xì)菌具有水解蛋白質(zhì)的特性，這與該研究結(jié)果一致。
3討論與結(jié)論
白星花金龜幼蟲(chóng)能夠有效降解秸稈、菌渣等農(nóng)業(yè)廢棄物，研究表明其腸道中存在豐富的與纖維素降解有關(guān)的微生物，而目前對(duì)于其幼蟲(chóng)相關(guān)的微生物的研究也主要集中在腸道微生物上。黃婉秋等［6］從白星花金龜幼蟲(chóng)腸道中分離出1株具有較強(qiáng)分解纖維素能力的纖維單胞菌。魏盼盼［11］對(duì)白星花金龜幼蟲(chóng)腸道微生物多樣性研究發(fā)現(xiàn)，具有降解木質(zhì)纖維素和固氮功能的纖維菌屬、纖維桿菌屬、纖維素單胞菌屬、假單胞菌屬、鏈霉菌屬等優(yōu)勢(shì)菌屬在中腸和后腸中都有存在。田小燕等［12］對(duì)飼喂玉米秸稈的白星花金龜幼蟲(chóng)腸道微生物細(xì)菌多樣性研究發(fā)現(xiàn)，假單胞菌屬和脫硫弧菌屬分別為幼蟲(chóng)中腸和后腸中的優(yōu)勢(shì)菌屬。
該研究從白星花金龜幼蟲(chóng)新鮮蟲(chóng)糞中共分離出細(xì)菌5種、真菌3種，對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，初步確定其分類地位及所屬類群，分別為纖維化纖維微細(xì)菌、鉛黃腸球菌、原玻璃蠅節(jié)桿菌、谷氨酸桿菌、灰色鏈霉菌、熱帶假絲酵母、長(zhǎng)枝木霉和白地霉。通過(guò)選擇培養(yǎng)基進(jìn)行初步的功能篩選，確定纖維化纖維微細(xì)菌和灰色鏈霉菌具有降解蛋白質(zhì)的能力，原玻璃蠅節(jié)桿菌、灰色鏈霉菌、白地霉和長(zhǎng)枝木霉具有降解纖維素的能力，但其降解能力強(qiáng)弱仍需進(jìn)一步定量研究。
農(nóng)業(yè)生產(chǎn)活動(dòng)中產(chǎn)生的廢棄物種類多、數(shù)量大，但目前對(duì)于農(nóng)業(yè)廢棄物資源化利用率相對(duì)較低。我國(guó)每年都能生產(chǎn)出大量的食用菌廢菌渣，因其利用過(guò)程中存在諸多難點(diǎn)，導(dǎo)致其實(shí)際循環(huán)利用率相對(duì)較低。而利用微生物發(fā)酵技術(shù)對(duì)農(nóng)業(yè)廢棄物進(jìn)行無(wú)害化處理，已成為生態(tài)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要方向。研究表明，纖維化纖維微細(xì)菌、原玻璃蠅節(jié)桿菌、灰色鏈霉菌等細(xì)菌，以及長(zhǎng)枝木霉、白地霉等真菌具有降解纖維素和蛋白質(zhì)的能力［13-15］，且在增加土壤養(yǎng)分、提高土壤酶活［16］、增強(qiáng)植物抗逆性［17-18］、吸附金屬離子［19-20］等方面表現(xiàn)出積極作用。因此，從飼喂食用菌廢菌渣的白星花金龜幼蟲(chóng)蟲(chóng)糞中分離可培養(yǎng)微生物，篩選降解纖維素和蛋白質(zhì)的功能菌，將為食用菌廢菌渣的循環(huán)利用提供菌種資源。
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