2、結(jié)果與分析
2.1金黃短桿菌CT-A16的生物學(xué)特性
2.1.1金黃短桿菌CT-A16的培養(yǎng)特征和形態(tài)特征
取供試金黃短桿菌CT-A16接種于NA平板培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)3 d，觀察到菌落顏色為白色，菌落邊緣光滑平整，通過(guò)顯微鏡觀察菌體呈短桿狀。對(duì)菌體進(jìn)行革蘭氏染色、芽孢染色、莢膜染色，結(jié)果顯示金黃短桿菌CT-A16為革蘭氏染色為陽(yáng)性，無(wú)芽孢，有莢膜。
2.1.2金黃短桿菌CT-A16最適溫度的測(cè)定
由圖1可知，金黃短桿菌CT-A16的OD值隨著培養(yǎng)溫度的逐步升高而升高，在培養(yǎng)溫度為30℃時(shí)OD值最大。在30~40℃時(shí)，隨著培養(yǎng)溫度的增加，OD值呈下降趨勢(shì)，因此金黃短桿菌CT-A16的最適生長(zhǎng)溫度為30℃。
2.2金黃短桿菌CT-A16最適pH值
由金黃短桿菌CT-A16最適pH值的測(cè)定結(jié)果（圖2）表明：隨著pH值的升高，金黃短桿菌CTA16菌液的OD值逐步升高，待pH值為6時(shí)達(dá)到最高值，隨后OD值隨pH值的增加呈下降趨勢(shì)。即最佳生長(zhǎng)pH值為6.0，適宜金黃短桿菌CT-A16生長(zhǎng)的pH值范圍為5.0~7.0。
圖2不同pH值對(duì)金黃短桿菌CT-A16的影響
2.3金黃短桿菌CT-A16的生長(zhǎng)曲線
金黃短桿菌CT-A16生長(zhǎng)曲線（圖3）的測(cè)定結(jié)果表明，由金黃短桿菌CT-A16不同時(shí)段內(nèi)的OD值所反映出的生長(zhǎng)曲線呈現(xiàn)出階段性變化。第一階段為遲滯期：生長(zhǎng)16 h內(nèi)，OD值呈現(xiàn)逐步增長(zhǎng)的趨勢(shì)，增長(zhǎng)速度非常緩慢；第二階段為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期：生長(zhǎng)16~36 h內(nèi)，OD值呈現(xiàn)快速增長(zhǎng)趨勢(shì)，36 h時(shí)OD值達(dá)到峰值；隨后進(jìn)入穩(wěn)定期：生長(zhǎng)36~40 h（或40 h以后）內(nèi)OD值不再增加并出現(xiàn)降低現(xiàn)象。綜上所述，在測(cè)定時(shí)間內(nèi),內(nèi)生金黃短桿菌CT-A16的生長(zhǎng)階段為：遲滯期細(xì)菌接種至培養(yǎng)基后，對(duì)新環(huán)境有一個(gè)短暫適應(yīng)過(guò)程；對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)菌快速繁殖增長(zhǎng)，菌數(shù)顯著增多，此時(shí)期活菌數(shù)直線上升，細(xì)菌以穩(wěn)定的幾何級(jí)數(shù)極快增長(zhǎng);第三階段穩(wěn)定期培養(yǎng)40 h時(shí)內(nèi)生細(xì)菌基本上是處于穩(wěn)定期的階段，尚未進(jìn)入衰退階段。
圖3金黃短桿菌CT-A16的生長(zhǎng)曲線
2.4金黃短桿菌CT-A16發(fā)酵過(guò)濾液對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果
通過(guò)對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察，統(tǒng)計(jì)不同比例內(nèi)生金黃短桿菌過(guò)濾液對(duì)不同病原菌的抑制率（表1），由表1可以看出，內(nèi)生金黃短桿菌CTA16對(duì)病原菌的抑制效果較好，在菌液濃度為20%時(shí)，內(nèi)生金黃短桿菌CT-A16對(duì)油疤病菌原菌的抑制效果最好。
表1不同濃度金黃短桿菌CT-A16過(guò)濾液對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率
2.5金黃短桿菌CT-A16發(fā)酵滅菌液對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果
通過(guò)對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察，統(tǒng)計(jì)不同種不同比例內(nèi)生金黃短桿菌滅菌液對(duì)病原菌的抑制率，結(jié)果如表2所示，濃度為20%的金黃短桿菌CT-A16滅菌液對(duì)油疤病菌的抑制效果最佳，其次是疣孢病菌、蛛網(wǎng)病菌。
2.6金黃短桿菌CT-A16發(fā)酵過(guò)濾液對(duì)病原菌孢子萌發(fā)的抑制效果
通過(guò)對(duì)病原菌孢子萌發(fā)生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察，統(tǒng)計(jì)不同比例內(nèi)生菌過(guò)濾液對(duì)不同病原菌的抑制率，結(jié)果見(jiàn)表3。內(nèi)生金黃短桿菌CT-A16對(duì)于病原菌抑制效果最好的濃度為40%，對(duì)疣孢病菌、油疤病菌都能100%地抑制孢子的萌發(fā)，對(duì)蛛網(wǎng)病菌孢子萌發(fā)的抑制效果相對(duì)較弱。
表3不同濃度金黃短桿菌CT-A16過(guò)濾液對(duì)病原菌孢子萌發(fā)的抑制率
2.7金黃短桿菌CT-A16發(fā)酵滅菌液對(duì)病原菌孢子萌發(fā)的抑制效果
通過(guò)對(duì)病原菌孢子萌發(fā)生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察，統(tǒng)計(jì)不同比例內(nèi)生菌滅菌液對(duì)不同病原菌孢子萌發(fā)的抑制效果，結(jié)果見(jiàn)表4。濃度為40%的內(nèi)生金黃短桿菌CT-A16發(fā)酵滅菌液對(duì)病原菌的抑制效果最佳，對(duì)疣孢病菌和油疤病菌的抑制效果較好。
表4不同濃度金黃短桿菌CT-A16滅菌液對(duì)病原菌孢子萌發(fā)的抑制率
2.8金黃短桿菌CT-A16揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果
通過(guò)觀察病原菌與內(nèi)生金黃短桿菌CT-A16對(duì)接密封的培養(yǎng)皿中病原菌的菌絲生長(zhǎng)狀況，結(jié)果表明：內(nèi)生金黃短桿菌CT-A16揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)具有一定的抑制作用。從表5可以看出，內(nèi)生金黃短桿菌CT-A16揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)于油疤病菌、蛛網(wǎng)病菌的抑制效果比較好，對(duì)于疣孢病菌的抑制效果相對(duì)較弱。
表5金黃短桿菌CT-A16揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響
3結(jié)論與討論
金黃短桿菌CT-A16的生物學(xué)特性測(cè)定結(jié)果表明，金黃短桿菌CT-A16菌落顏色為白色，菌落邊緣光滑平整，通過(guò)顯微鏡觀察菌體呈短桿狀。對(duì)菌體進(jìn)行革蘭氏染色、芽孢染色、莢膜染色，結(jié)果顯示：金黃短桿菌CT-A16為革蘭氏染色為陽(yáng)性，無(wú)芽孢，有莢膜。金黃短桿菌CT-A16進(jìn)行最適溫度為30℃，最適pH值為6.0。
由金黃短桿菌CT-A16對(duì)3種食用菌病原菌的生防效果可以看出，不同濃度金黃短桿菌CT-A16過(guò)濾液和滅菌液對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)均具有一定的抑制效果。其中濃度為20%的金黃短桿菌CTA16過(guò)濾液對(duì)病原菌的抑制效果較好，對(duì)疣孢病菌的抑制率達(dá)到66.53%，對(duì)油疤病菌的抑制率為62.73%，對(duì)蛛網(wǎng)病菌的抑制率為83.58%。在不同濃度金黃短桿菌CT-A16過(guò)濾液和滅菌液對(duì)病原菌孢子萌發(fā)的測(cè)定中發(fā)現(xiàn)，濃度為40%金黃短桿菌CT-A16對(duì)于3個(gè)病原菌的抑制效果都非常明顯；金黃短桿菌CT-A16的揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)也表現(xiàn)出一定的抑制作用。
內(nèi)生菌對(duì)植物病害的生物防治已研究多年并取得了很好的應(yīng)用效果，何紅等也證實(shí)了分離自辣椒的內(nèi)生芽孢桿菌對(duì)辣椒炭疽病菌有拮抗活性。用植物內(nèi)生的枯草芽孢桿菌處理辣椒苗，然后再接種病原菌，能夠?qū)l(fā)病率降低81.49%~93.34%。內(nèi)生菌的拮抗效果除了在實(shí)驗(yàn)室的抑菌效果測(cè)定外，還需要在大生產(chǎn)過(guò)程中的實(shí)際應(yīng)用，以進(jìn)一步驗(yàn)證內(nèi)生菌的拮抗效果，這將是今后內(nèi)生細(xì)菌的研究熱點(diǎn)。
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