2結(jié)果
2.1 RPIF中阪崎克羅諾桿菌生長(zhǎng)曲線(xiàn)
阪崎克羅諾桿菌ATCC BAA894在RPIF中4℃培養(yǎng)72 h后的生長(zhǎng)曲線(xiàn)不符合S型，見(jiàn)圖1a，表1。在15、25、37℃下培養(yǎng)后，采用Gom pertz、Logistic模型進(jìn)行擬合，見(jiàn)表1，表2。各擬合方程的標(biāo)準(zhǔn)差和相關(guān)系數(shù)表明，與Logistic模型相比，Gom pertz方程擬合的一級(jí)生長(zhǎng)模型較好。
圖1不同溫度下阪崎克羅諾桿菌的生長(zhǎng)曲線(xiàn)
表1 RPIF中阪崎克羅諾桿菌在4、15、25、37℃下的生長(zhǎng)log(CFU·m L-1)
表2 RPIF中阪崎克羅諾桿菌在15、25、37℃下的參數(shù)及Gompertz模型
Gom pertz模型顯示，在15、25、37℃培養(yǎng)時(shí)，RPIF中阪崎克羅諾桿菌的生長(zhǎng)規(guī)律遵循單細(xì)胞微生物典型的S型生長(zhǎng)曲線(xiàn)，見(jiàn)圖1b、c、d。在一定培養(yǎng)溫度范圍內(nèi)，溫度越高，阪崎克羅諾桿菌生長(zhǎng)繁殖越快，到達(dá)最大生長(zhǎng)速率所需時(shí)間t1、到達(dá)穩(wěn)定期所需時(shí)間t2及遲滯時(shí)間λ越短，最大生長(zhǎng)速率μm越高，見(jiàn)表3。
2.2溫度對(duì)RPIF中阪崎克羅諾桿菌生長(zhǎng)的影響
繪制R atkow sky平方根模型可反應(yīng)最大生長(zhǎng)速率的平方根與溫度間的關(guān)系。其形式為：b(T-Tmin)，b為系數(shù)，Tmin為理論最低生長(zhǎng)溫度，即回歸線(xiàn)延長(zhǎng)線(xiàn)與溫度軸相交所得的溫度。結(jié)果表明，溫度升高，最大生長(zhǎng)速率的平方根同步增加，見(jiàn)圖2。最優(yōu)擬合的二級(jí)模型中的參數(shù)見(jiàn)表4，具體方程如下：
對(duì)阪崎克羅諾桿菌生長(zhǎng)速率模型的準(zhǔn)確性驗(yàn)證后，殘差檢驗(yàn)結(jié)果表明RPIF中阪崎克羅諾桿菌生長(zhǎng)速率殘差均在±0.05之間，即預(yù)測(cè)模型在α=0.05水平可信，見(jiàn)圖3。實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值對(duì)比檢驗(yàn)結(jié)果表明，阪崎克羅諾桿菌生長(zhǎng)速率實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值較為接近，預(yù)測(cè)結(jié)果可靠，見(jiàn)圖4。使用準(zhǔn)確性因子與偏差性因子對(duì)預(yù)測(cè)值和實(shí)測(cè)值分析后，所得偏差性因子的值為1.0096，準(zhǔn)確性因子的值為0.9905，均符合模型可接受條件的要求，即該模型可較好反映沖調(diào)奶粉中阪崎腸桿菌在不同溫度下生長(zhǎng)速率的高低，見(jiàn)表5。研究獲得的方程式可以用來(lái)預(yù)測(cè)RPIF中阪崎克羅諾桿菌的生長(zhǎng)，以避免食用PIF的感染風(fēng)險(xiǎn)。
表3 RPIF中阪崎克羅諾桿菌在15、25、37℃下Gompertz模型參數(shù)
圖2溫度對(duì)RPIF中阪崎克羅諾桿菌生長(zhǎng)影響的平方根模型
表4 RPIF中阪崎克羅諾桿菌的平方根模型參數(shù)
圖3 RPIF中阪崎克羅諾桿菌生長(zhǎng)速率殘差
圖4 RPIF中阪崎克羅諾桿菌在15、25、37℃下生長(zhǎng)速率的實(shí)際值與預(yù)測(cè)值比較
表5阪崎克羅諾桿菌生長(zhǎng)速率實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值分析
3討論
RPIF是阪崎克羅諾桿菌生長(zhǎng)的良好物質(zhì)，因此應(yīng)在PIF加工和食用過(guò)程中嚴(yán)格控制和預(yù)防該致病菌。日常生活中，有些嬰幼兒在飲用RPIF時(shí)并不能一次性飲用完，家長(zhǎng)可能會(huì)將其放置于4℃冰箱或室溫保存，以供嬰幼兒再次飲用。還有些情況下，嬰幼兒飲用完畢的奶瓶并沒(méi)有及時(shí)清洗，而是放置于室溫，這剛好是PIF中可能存在的少量阪崎克羅諾桿菌大量生長(zhǎng)繁殖的良好條件，結(jié)果導(dǎo)致嚴(yán)重的食品安全問(wèn)題。本研究探討了RPIF中阪崎克羅諾桿菌在4、15、25、37℃下的生長(zhǎng)情況，以此模擬RPIF或奶瓶貯存于冰箱及室溫的環(huán)境溫度，預(yù)測(cè)、評(píng)估未飲用完的RPIF和未立即清洗的空奶瓶的安全性。
阪崎克羅諾桿菌在RPIF中生長(zhǎng)一級(jí)模型的建立一定程度反映了該菌的生長(zhǎng)規(guī)律。Fakruddin等采用Gom pertz模型對(duì)10.0～40.0℃下RPIF中阪崎克羅諾桿菌的生長(zhǎng)進(jìn)行擬合，經(jīng)評(píng)價(jià)后發(fā)現(xiàn)Gom pertz模型擬合效果好，適合描述不同溫度下阪崎克羅諾桿菌的生長(zhǎng)。邱紅玲等研究者也指出修正的Gom pertz能較好地?cái)M合復(fù)原乳中3種致病菌在4～42℃或者25～42℃條件下的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)。與以上研究結(jié)果相似，本研究顯示采用Gom pertz、Logistic模型進(jìn)行擬合，各擬合方程的標(biāo)準(zhǔn)差和相關(guān)系數(shù)表明Gom pertz方程擬合的一級(jí)生長(zhǎng)模型更好。
RPIF中的阪崎克羅諾桿菌開(kāi)始生長(zhǎng)的遲滯期長(zhǎng)短不僅取決于環(huán)境，還取決于其處于何種生長(zhǎng)階段。根據(jù)對(duì)生長(zhǎng)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，我們發(fā)現(xiàn)，雖然在RPIF中接種穩(wěn)定期的阪崎克羅諾桿菌，但15、25、37℃下其生長(zhǎng)曲線(xiàn)均呈現(xiàn)S型且遲滯期較短。Kandhai等研究者對(duì)RPIF中不同生長(zhǎng)階段的阪崎克羅諾桿菌的生長(zhǎng)曲線(xiàn)進(jìn)行Gom pertz模型擬合，研究表明預(yù)培養(yǎng)條件不會(huì)影響RPIF中阪崎克羅諾桿菌的生長(zhǎng)速率或遲滯期，并且遲滯期通常很短。另一研究顯示，盡管在10℃儲(chǔ)藏RPIF可以觀察到明顯的遲滯期，但升高溫度至25、37、45℃并不能觀察到明顯的遲滯期。與預(yù)培養(yǎng)時(shí)間和溫度對(duì)生長(zhǎng)速率和遲滯期的影響相似，其他結(jié)果表明，接種量（即高或低接種量）和RPIF組成對(duì)阪崎克羅諾桿菌的生長(zhǎng)也沒(méi)有影響，這可能由于RPIF營(yíng)養(yǎng)豐富，阪崎克羅諾桿菌較短時(shí)間可內(nèi)適應(yīng)生長(zhǎng)環(huán)境。以上結(jié)果表明，如果未正確保存剩余的RPIF或未及時(shí)清洗奶瓶，將有可能感染阪崎克羅諾桿菌，并對(duì)嬰幼兒構(gòu)成巨大的潛在危害。
溫度是影響RPIF中阪崎克羅諾桿菌的生長(zhǎng)的因素之一。本研究通過(guò)建立二級(jí)模型并對(duì)阪崎克羅諾桿菌的生長(zhǎng)速率和相關(guān)參數(shù)進(jìn)行了殘差檢驗(yàn)、實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值對(duì)比檢驗(yàn)以及準(zhǔn)確性因子與偏差性因子檢驗(yàn)，其中準(zhǔn)確性因子可用于衡量預(yù)測(cè)值和實(shí)測(cè)值之間的接近程度，越接近1表示模型準(zhǔn)確性越高，Braun等認(rèn)為準(zhǔn)確性因子值在1.1～1.9之間，模型均可接受。G iffel等認(rèn)為偏差性因子值在0.75～1.25之間，模型可被接受，R oss等認(rèn)為偏差性因子值在0.9～1.05之間，模型可靠性較高。研究結(jié)果表明二級(jí)模型預(yù)測(cè)結(jié)果可靠，隨著溫度升高，RPIF中的阪崎克羅諾桿菌最大生長(zhǎng)速率也會(huì)增加。Fang等通過(guò)生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)模型的建立及比較發(fā)現(xiàn)，在RPIF中，未經(jīng)熱處理的菌株生長(zhǎng)溫度范圍為6.5～51.4℃，熱處理菌株的生長(zhǎng)溫度范圍為6.9～50.1℃，未經(jīng)熱處理和熱損傷的菌株的生長(zhǎng)速率無(wú)顯著差異。Kandhai等研究發(fā)現(xiàn)57株阪崎克羅諾桿菌中有50株在47℃下可以生長(zhǎng)，但在4℃下均無(wú)生長(zhǎng)，腦心浸肉湯（BH I）中阪崎克羅諾桿菌的最低生長(zhǎng)溫度為5.5～8℃。與早期研究結(jié)果相似，本研究發(fā)現(xiàn)RPIF中阪崎克羅諾桿菌在4℃下可存活72 h且菌量穩(wěn)定，這一溫度相當(dāng)于部分地區(qū)冬季的室外溫度，也相當(dāng)于冰箱儲(chǔ)存溫度。結(jié)果顯示，如果剩余RPIF儲(chǔ)存在冰箱或更低溫度下，不會(huì)被阪崎克羅諾桿菌或低濃度阪崎克羅諾桿菌污染，無(wú)法造成感染，則剩余的RPIF仍可以飲用。
阪崎腸桿菌是一種條件性致病菌，對(duì)特殊人群的致死率甚至高達(dá)40%～80%。2003年P(guān)agotto等首次研究指出，腹腔注射阪崎克羅諾桿菌劑量為×108CFU/m L的RPIF時(shí)，對(duì)乳鼠具有致死作用。2012年徐桂香等研究表明，將×108CFU/m L的野生阪崎克羅諾桿菌腹腔注射出生三日的SD乳鼠，平均致死時(shí)間為6.5 h，且記錄了不同注射劑量實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組死亡情況，結(jié)果顯示野生阪崎克羅諾桿菌的半致死劑量為3.162×106CFU。由于關(guān)于阪崎克羅諾桿菌對(duì)人致病的安全限量和相關(guān)毒力因子的信息有限，因此，所有的阪崎克羅諾桿菌都被視為潛在的病原體。本研究的結(jié)果可以預(yù)測(cè)4個(gè)季節(jié)不同溫度下，阪崎克羅諾桿菌RPIF中的生長(zhǎng)情況，有助于建立有效的食品安全控制措施。
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